大鼠肝脏提取苯丁酸氮芥方法

　　大鼠肝脏提取苯丁酸氮芥方法

　　苯丁酸氮芥可按照下列方法进行提取：

　　目的：基于苯丁酸氮芥（chlorambucil，CHB）激活微粒体谷胱甘肽S-转移酶1（microsomal glutathione S—transferase 1，mGST1）可显著加快催化CHB—GSH结合效应，探讨大鼠mGST1激活对CHB致不同来源肿瘤细胞株毒性的影响。

　　方法：取雄性Sprague—Dawley大鼠肝脏，制备微粒体，去除细胞质GST的污染，获得纯化mGST1并测其活性。分别设CHB组，CHB＋GSH对照组以及CHB＋GSH＋mGST1组。分别与PC-3、K562、HepG2和P388D1细胞株培养24h、48h、72h后，以IC50作为细胞损伤指标；

　　作用8h后以JC-1染色评价线粒体膜电位（△ψm）改变作为损伤早期指标；作用48h以后以AO／EB染色差别作为细胞核损伤后期指标。结果：在mGST1存在环境下，24h、48h、72h PC-3、K562、HepG2和P388D1细胞株IC50均有显著增加。72hCHB＋GSH对照组PC-3、K562、HepG2和P388D1细胞株的IC50分别为（6。13±2。42）／μmol／L、（3。77±0。95）／μmol／L、（5。36±3。06）／μmol／L和（9。42±1。77）／μmol／L；CHB＋GSH＋mGST1组显著高于CHB＋GSH对照组，相应IC50（15。01±3。47）μmol／L（P〈0。001）、（8。33±1。72）／μmol／L（P〈0。001），（26。74±5。45）μmol／L（P〈0。001）和（16。93±0。85）μmol／L（P〈0。001）。并伴有线粒体△ψm降低和核损伤减轻，呈明显的时效关系。

　　结论：mGST1在含有丰富的GSH溶液中，可显著降低CHB对上述肿瘤细胞株的细胞毒性作用。